Карповские чтения 2004

ВИЗНАЧЕННЯ ЖИТТЄЗДАТНОСТІ ЕПІДЕРМОЦИТІВ АУТОДЕРМОТРАНСПЛАНТАТІВ К.С.Волков, А.В.Довбуш, О.П.Андріїшин, А.О.Котик, О.Я.Чорнописький Кафедра гістології
Тернопільська медичної академії ім. І.Я.Горбачевського

Проблема зберігання трансплантатів в різних консервуючих середовищах достатньо досліджена. Для встановлення життєздатності цих тканин використовують прижиттєві барвники: трипановий синій, метиленовий синій та ін. Визначення фунціональної активності клітин базується на проникності їх мембран. Плазмолема живих клітин непроникна для цих барвників. Світлі незафарбовані клітини є добре збереженими і функціонально активними. Темні, дифузно зафарбовані клітини вважають неживими. Їхня здатність поглинати фарбу зумовлена підвищенням проникності мембрани [1]. Третя, проміжна, група клітин характеризується накопиченням гранул фарби в цитоплазмі. Це живі, функціонально неактивні клітини. Вони, можливо, перебувають в стані паранекрозу. Ці дослідження проводяться на тканинних препаратах і не відображають функціональний стан клітин живої тканини. Достовірність визначення життєздатності клітин суттєво знижується після виготовлення тканинних зрізів.

Запропонований нами спосіб дозволяє визначити життєздатність окремо виділених клітин і усуває вказаний недолік досліджень. Для визначення життєздатності консервованої шкіри нами запропонований спосіб [2], згідно якого аутодермотрансплантат інкубували в 0,25% в розчині трипсину на фосфатному буфері з pH 7,4 в термостаті при температурі 37⁰С протягом 2,5 год. Суспензію окремо розділених епідермоцитів промивали буферним розчином і центрифугували в сироватці при 1000 об./хв протягом 5 хв. З нижньої фракції виготовляли мазки кератиноцитів базального та остистого шарів, які зафарбовували 0,4 % розчином трипанового синього. Мікропрепарат досліджували у світловому мікроскопі МБИ -6 при збільшенні 900 (ок. х 15, об’єктив х 60) та підраховували кількість зафарбованих (нежиттєздатних) і незафарбованих (життєздатних) епідермоцитів. Кількісне співвідношення живих і мертвих епідермоцитів підвищує критерій достовірності визначення життєздатності клітин і можу бути рекомендований для оцінки функціональної активності досліджуваних біологічних об’єктів.

Список літератури:

1. Микроскопическая техника. Под ред. Д.С. Саркисова и Ю.Л. Перова, М: Медицина, 1996. 544 с.

2. Деклараційний патент на винахід №2001031430 від 15.01.2002 "Спосіб визначення життєздатності клітин".

// Карповские чтения: Материалы I Всеукраинской научной морфологической конференции (Днепропетровск, 18-21 мая 2004 г.).
Под ред. профессора И.В.Твердохлеба.- Днепропетровск: Пороги, 2004. - 75с. [содержание...]